Anwendung von CAR-T Zellen modifiziert mit bispezifischen Antigen chimären Rezeptoren in der Behandlung von Prostatakrebs

Problem zu lösen: 1. Bestimmen Sie ein oder mehrere Prostatakrebs-spezifische Antigene durch immunhistochemisches Screening pathologischer Abschnitte, einschließlich PSMA, ROR-1, PSMA-PDL1, CYR61, PSCA, Lewis Y, EGFR-Antigene, etc. 2. Konstruieren Sie einen retroviralen Vektor pLNCX-PMA-PDL1 CAR, der auf den oben genannten spezifischen chimären gemischten Antigenrezeptor (wie PSMA-PDL1 CAR) und einen retroviralen Vektor pLNCX-LUC2 abzielt, der Luciferase trägt, und verpacken Sie das entsprechende Virus mit einem retroviralen Verpackungskit. 3. Das pLNCX-LUC2-Virus infiziert Tumorzellen wie Hela, Huh7, PC3 und LNCaP und wählt die stabile Expression der LUC2-Zelllinie pLNCX-PMA-PDL1. CAR-Virus infiziert T-Zellen und wählt die stabile Expression der PSMA-PDL1 Zelllinie für nachfolgende Experimente aus. 4. Luciferase-Biolumineszenz wurde verwendet, um die abtötende Wirkung von humanen peripheren Blutlymphozyten (CAR-T) auf PSMA-positive Tumorzellen in vitro nachzuweisen. 5. Die stabile Zelllinie des pLNCX-LUC2-Virus wurde in nackte Mäuse transplantiert und die in vivo hemmende Wirkung humaner peripherer Blutlymphozyten (PBL-CAR) auf das Tumorwachstum wurde getestet, oder PC3 wurde in einem künstlichen Lungenmetastasemodell von nackten Mäusen verwendet, um die hemmende Wirkung von PBL-CAR auf die Tumormetastasierungsfähigkeit zu detektieren. Das geplante Ziel ist es, ein oder mehrere Prostatakrebs-spezifische Antigene zu identifizieren und zu speziell anerkannten chimären Antigen-Rezeptoren (CARs) zu konstruieren, um eine Grundlage für die nächste Entwicklung von CAR-T-Zellen zu schaffen. 2. Klären Sie die Targeting- und Tötungsaktivität von T-Zellen, die mit chimärem Antigenrezeptor (CAR) auf Prostatakrebszellen modifiziert werden, und führen Sie Tierversuche durch, um günstige Bedingungen für die Verwendung von CAR-T-Zellen in der klinischen Forschung von Prostatakrebs bereitzustellen. Anwendung von CAR-T Zellen modifiziert mit dualen spezifischen Antigen chimären Rezeptoren in der Behandlung von Prostatakrebs: Prostatakrebs (PCa) stellt eine Bedrohung für das Leben und die Gesundheit von Männern mittleren und älteren Alters dar. Laut Daten, die im Magazin CACancerJClin von Siebel et al. im 2015 veröffentlicht wurden, erreichte die Inzidenz von PCa in den Vereinigten Staaten 26% in der KrebsInzidenz und die zweite in der Sterblichkeitsrate mit 9%. Obwohl die Inzidenz von Prostatakrebs in China niedriger ist als in den europäischen und amerikanischen Ländern, hat die Inzidenz von Prostatakrebs in den letzten Jahren mit der Alterung der Bevölkerung, Veränderungen der Lebensgewohnheiten und der allmählichen Popularisierung von körperlichen Untersuchungen auch einen Aufwärtstrend gezeigt und rangiert an dritter Stelle unter männlichen urogenitalen Malignomen. Prostatakrebs hat einen versteckten Ausbruch und kann sich in mittlere bis späte Stadien entwickeln, was leicht zu schwierigen Problemen wie Metastasen und Medikamentenresistenz führen kann, die die Lebensqualität und Lebensdauer der Patienten ernsthaft beeinträchtigen. Die Früherkennung und Behandlung von Prostatakrebs ist von großer Bedeutung. Androgenkastration oder endokrine Therapie, die Androgene auf der Ebene des Androgenrezeptors blockiert, ist der Standardbehandlungsplan für fortgeschrittenen Prostatakrebs. 80% -90% der fortgeschrittenen Prostatakrebspatienten unterziehen sich jedoch einer Hormontherapie für zwölf bis 18 Monate, bevor sie vom androgenen abhängigen zu aggressiveren hormonunabhängigen Prostatakrebs übergehen, der nach männlicher Kastrationsbehandlung rückläufig auftritt und androgenresistenten Prostatakrebs bildet. Sobald der Tumor hormonunabhängige Eigenschaften aufweist, entwickelt er eine hohe Resistenz gegen alle Chemotherapeutika und ist unwirksam gegenüber anderen weiteren Behandlungsmethoden. Daher ist eine wirksamere gezielte Therapie zur unvermeidlichen Wahl für die nächste Reaktion auf Prostatakrebs geworden. Chimerische Antigen-Rezeptoren (CARs) werden durch die Fusion von Antikörper-spezifischen Zielregionen und T-Zell-Signalregionen gebildet. Wenn T-Zellen CARs exprimieren, verleihen sie T-Zell-Antigen-Spezifität, wodurch Tumorzellen gezielt angegriffen und abgetötet werden. Derzeit hat die CAR-T-Zelltherapie eine gute Wirksamkeit bei B-Zell abgeleiteten Tumoren erreicht. Theoretisch können CAR-T-Zellen auch bei soliden Tumoren eine Rolle spielen, aber weitere Erforschung und Verbesserung sind erforderlich. Die Behandlung von CAR-T-Zell-soliden Tumoren steht jedoch vor drei Herausforderungen: (1) einem Mangel an geeigneten spezifischen tumorassoziierten Antigenen; (2) CAR-T-Zellen sind im Tumorbereich nicht leicht angereichert; und (3) der immunsuppressiven Wirkung der Tumormikroumgebung auf CAR-T-Zellen. Die CAR-T-Zelltherapie Strategie kann ideale Ergebnisse in hämatologischen Tumoren erzielen. Ein wichtiger Grund ist, dass hämatologische Tumoren spezifische Ziele haben, wie die Expression von CD19 in B-Zell hämatologischen Malignitäten, die fast 100% erreichen, während in soliden Tumoren, es schwierig ist, spezifische Antigene wie hämatologische Tumoren zu finden. Die meisten Antigene sind relativ hoch exprimiert auf Tumorzellen, und normale Zellen haben auch eine geringe Menge an Expression. Daher ist es schwierig, unspezifische Tötung normaler Zellen zu vermeiden. Heterogenität ist eines der prominenteren Merkmale solider Tumore, was bedeutet, dass selbst Tumore in demselben Patienten und Ort möglicherweise nicht alle die gleichen tumorassoziierten Antigene exprimieren. Selbst bei einer Tumorläsion kann kein einzelnes Zielantigen alle Tumorzellen abdecken. Wird nur eine einzelne Target-CAR-T-Zelle zur Behandlung solider Tumore eingesetzt, so bestimmt die hochheterogene Natur solider Tumore theoretisch, dass sie zwangsläufig wiederkehren oder nicht ausgerottet werden können. Daher ist die Auswahl tumorspezifischer Antigene der größte Engpass für die CAR-T Behandlung solider Tumore.